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TC20細(xì)胞計數(shù)儀在實際應(yīng)用中應(yīng)該如何進(jìn)行操作?

更新時間:2019-06-10      點擊次數(shù):1128
  TC20細(xì)胞計數(shù)儀采用革新性的血細(xì)胞計數(shù)室設(shè)計,能使細(xì)胞呈單層、靜止、均一的狀態(tài)平鋪于檢測室中,確保了多個視野的光學(xué)聚焦的性,消除了信號重疊和漂移現(xiàn)象。此外,該技術(shù)還為那些檢測流動中的細(xì)胞某一單一視野、通過移動樣品來聚焦成像的儀器提供了解決方案。
 
  TC20細(xì)胞計數(shù)儀的原理:
  電阻抗檢測原理血細(xì)胞是相對不良導(dǎo)體,當(dāng)血細(xì)胞懸浮電解質(zhì)中,將小孔管插入細(xì)胞懸液,使其管內(nèi)充滿稀釋液,當(dāng)一個細(xì)胞通過小孔時,瞬間引起電壓變化出現(xiàn)一個脈沖信號,細(xì)胞體積越大,引起脈沖越大,產(chǎn)生脈沖振幅越高。
  流式細(xì)胞術(shù)加光學(xué)檢測原理利用流式細(xì)胞術(shù)使單個細(xì)胞隨著流體動力聚集的鞘流液在通過激光照射的檢測區(qū)時,使光束發(fā)生折射、衍射和散射,散射光光檢測器接受后產(chǎn)生脈沖,脈沖大小與被照細(xì)胞的大小成正比,脈沖的數(shù)量代表了被照細(xì)胞的數(shù)量。
 

  TC20細(xì)胞計數(shù)儀怎么操作:
  1、將計數(shù)板及蓋玻片擦拭干凈,并將蓋玻片蓋在計數(shù)板上。
  2、輕輕吹打細(xì)胞懸液,使細(xì)胞均勻分布;吸出少許細(xì)胞懸液滴在細(xì)胞入口,使細(xì)胞懸液充滿蓋玻片和計數(shù)板之間,靜置1-2min,使細(xì)胞沉降;注意蓋玻片下不要有氣泡,也避免細(xì)胞懸液進(jìn)入旁邊的槽中。
  3、在顯微鏡下對A/B/C/D四個大格內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù),壓在大格四周邊線上的細(xì)胞只計數(shù)壓在2條邊線上的細(xì)胞(如右側(cè)和下方);若鏡下有2個細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán),則應(yīng)按單個細(xì)胞計算;若細(xì)胞團(tuán)數(shù)量較多,占細(xì)胞總量的10%左右,則說明細(xì)胞分散不好會導(dǎo)致計算不準(zhǔn)確,需要重新制備細(xì)胞懸液。
  4、按公式計數(shù)細(xì)胞數(shù)量:細(xì)胞數(shù)/mL=四個大格內(nèi)細(xì)胞總數(shù)×104/4?(每一個大格的體積為長1mm×寬1mm×高0.1mm=0.1mm3,1mL=1000mm3,因此計算時需×104)。
 
  使用TC20細(xì)胞計數(shù)儀的注意事項:
  1、務(wù)必使分散成單個細(xì)胞,取樣計數(shù)前,充分混勻細(xì)胞懸液。
  2、顯微鏡下計數(shù)時,遇到2個以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán),應(yīng)按單個細(xì)胞計算。如果細(xì)胞團(tuán)>10%,說明細(xì)胞分散不充分。
  3、如果計數(shù)時細(xì)胞密度較大,數(shù)起來較麻煩也不容易計準(zhǔn),所以如果感覺細(xì)胞數(shù)量較多時,可以從細(xì)胞懸液中吸取10至100u1,用少量PBS稀釋后再作計數(shù)。
  4、注意蓋玻片下不要有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中。
  5、蓋玻片要盡量擦干凈,特別是不能帶有纖維,否則會造成體積不準(zhǔn)。另外四個大格中平均每個大格的細(xì)胞數(shù)宜在50-150左右,這樣總數(shù)會比較準(zhǔn)確。

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